El Laboratorio de Referencia de la Gripe de Andalucía, se enmarca en la Unidad de Virus y Cultivos Celulares del Servicio de Microbiología del Hospital Universitario Virgen de las Nieves de Granada.

En la Unidad de Virus y Cultivos celulares se diagnostican las infecciones víricas con los procedimientos más adecuados según el virus de que se trate: aislamiento en cultivos celulares, técnicas de amplificación genómica y/o técnicas de detección de antígeno.

En el conjunto de la Unidad trabajan cinco Técnicos de Laboratorio, de los cuales 2 están adscritos específicamente al Laboratorio de Referencia de Gripe de Andalucía.

Los objetivos fundamentales del trabajo que se desarrolla en dicho laboratorio son:

1.       Aislar e identificar precozmente las cepas de virus circulantes cada temporada y la aparición de nuevas variantes del virus, como la gripe AH1N1 causante de la actual pandemia.

2.       Caracterizar dichas cepas para encuadrarlas filogenéticamente y establecer el grado de similitud de su genoma con el de las cepas de gripe que se utilizan en la vacuna de cada temporada.

3.       Detectar posibles cambios que puedan afectar a su virulencia.

4.       Detectar la aparición de resistencias a los antivirales que se están usando.

5.       Detectar posibles recombinaciones de la cepa circulante con virus gripales de otros serotipos.

Para poder llevar a cabo estos objetivos, en el Laboratorio de Referencia se reciben muestras (nasales + faríngeos en medio de transporte de virus) de pacientes con sospecha de gripe atendidos en atención primaria por cada uno de los 128 médicos centinelas de la Red de Vigilancia de la Gripe de Andalucía, de pacientes con sospecha de gripe que por su gravedad requieren ingreso en cualquiera de los hospitales de Andalucía, así como de aquellos que aunque no requieran ingreso, pertenezcan a determinados grupos de riesgo como embarazadas o inmunodeprimidos profundos.

Los técnicos de Laboratorio son pieza clave en todo el proceso que se realiza a las muestras dentro del laboratorio:

         Recepcionan y clasifican las muestras que se van a trabajar.

         Mantienen los cultivos celulares adecuados para aislar gripe (línea celular MDCK-SIAT1, procedentes de riñón de perro modificadas genéticamente) y preparan tubos con la mismas para inocular muestras. Así mismo se encargan de preparar todos los medios para el mantenimiento de estas líneas celulares

         Inoculan las muestras para cultivar en tubos con las líneas celulares y separan de las mismas una fracción que es inactivada para posterior estudio mediante RT-PCR en tiempo real. Este proceso lo realizan en un área de Bioseguridad tipo 3, especial para el manejo de patógenos muy virulentos.

         Realizan todo el proceso diagnóstico de RT-PCR a tiempo real que incluye la extracción de ácidos nucléicos, la retrotranscripción para obtener cDNA (DNA complementario) y posteriormente la PCR en tiempo real propiamente dicha.

         Separan material genómico de muestras positivas mediante electroforesis capilar para posterior secuenciación de fragmentos específicos para análisis filogenético y estudio de resistencias.

         Realizan las técnicas de inmunofluorescencia indirecta para detectar las cepas que están creciendo en los cultivos.

         Se encargan del archivo ordenado de muestras y cepas en congeladores de -80ºC o en nitrógeno líquido según el caso, y revisan periódicamente el “stock” de material y reactivos para gestión de pedidos.

Con los procedimientos descritos en el Laboratorio de Referencia se detecta no sólo la nueva variante de gripe AH1N1 pandémica, sino también la posible circulación de gripe B, AH3N2 o AH1N1 estacionales, así como otras gripes que en los últimos años se han sometido a especial vigilancia como la gripe aviar AH5N1.

El laboratorio actúa coordinado con el del Centro Nacional de Microbiología y con el resto de laboratorios de referencia europeos y los datos que se suministran, en conjunto, son fundamentales para conocer la evolución de las epidemias o pandemias de gripe y para establecer las cepas que componen la vacuna que se utiliza cada temporada.

Francisca García Maldonado.
TEL Microbiología.